大鼠凝血酶抗凝血酶复合物（tat）elisa试剂盒

品牌：子科生物ziker，美国r&d,美国immonoway,美国sciencell,德国ibl

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●标本的采集及保存：

1．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

2．血浆：可用edta或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8℃1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物（tat）elisa试剂盒

●操作步骤

各试剂在使用前平衡至室温。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品100ul，注意不要有气泡，轻轻混匀，酶标板加上盖，37℃反应120分钟。

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。

3. 每孔加检测溶液a工作液 100ul，37℃,60分钟。洗板3次，350ul/每孔，甩干。

4. 每孔加检测溶液b工作液 100ul，37℃，60分钟，洗板5次，甩干。

5. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色30分钟(此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显)。

6. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应(此时兰色立转黄色)。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(od值)。

●注意：1．每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是*加底物溶液及2nh2so4。测量时先用此孔调od值至零。

      2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物（tat）elisa试剂盒

●洗板方法：

手工洗板方法：吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

●计算：以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，od值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的od值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与od值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的od值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

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