猪胰岛素（INS）ELISA试剂盒组成及试剂配制

1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。

2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过 洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

猪胰岛素（INS）ELISA试剂盒

标本的采集及保存

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过了夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响*检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

结果判断

1、30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；

2、以OD值为纵坐标，以标准品的浓度为横坐标，绘制曲线图；

3、根据样品的OD值查找对应的浓度范围；

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