变性细胞裂解液 Denaturing Lysis Buffer

规格：50ml  500ml

货号：ZK-PL4198

品牌：ZIKER/子科生物

产品详情说明书：
描述：组织细胞裂解缓冲液，为您提供完整的组织、细胞总蛋白制备方案，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。裂解液中含有去氧胆酸钠和EDTA，裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。

储存：4℃保存  12个月有效

规格：50ml  500ml

操作步骤：

制备细胞裂解产物：
1.800g 4℃离心 5 分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20ul, 107 cells=~100ul PCV）；
2.每 50～100ul PCV 加入5倍体积组织细胞裂解缓冲液（250~500ul）,冰浴放置10分钟，每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
3.12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物
注意：假如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，然后再进行步骤3
制备组织裂解产物：
1.取 50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的 PBS 洗涤2次离心弃去 PBS；
2.加入 0.5-1ml 预冷的组织细胞裂解缓冲液；
3.4℃用玻璃匀浆器匀浆 20-40 次，直到 95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；
4.12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物；
注意：假如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，然后再进行步骤4

说明：
1.在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
2.在做免疫沉淀时 在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白的降解；
3.在该裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择进行添加。