【 用法】

1.1 样品准备 取动物全血，待血液凝固后，4000r/min 离心 10 分钟，收集上清。或采集血液，待凝固后自然析出血清。血清应清亮，无溶血。

1.2 样品稀释 在血清稀释板中，用样品稀释液按 1:1 的比例稀释待检血清（例如：120μl样品稀释液中加 120μl 待检血清）；阴性、阳性对照不稀释，直接使用。

1.3 洗涤液配制 10 倍浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（20~25℃），摇动使沉淀溶解（建议在 37℃水浴锅中加热至完全溶解），然后用蒸馏水或纯水作 10 倍稀释，混匀（例如：10ml的浓缩洗涤液加上 90ml 纯水）。稀释好的洗涤液在 2~8℃可以存放 7 日。

1.4 操作步骤

1.4.1 取抗原包被板（根据样本多少，可拆开分次使用），每孔加入稀释好的洗涤液 300μl，不必静置，弃掉孔中洗涤液，洗涤 2 次， 一次拍干。每孔加入稀释好的样本 100μl；另外设阳性对照、阴性对照各 2 孔，100μl/孔。置 37℃孵育 60 分钟。

1.4.2 弃去板中液体，每孔加入稀释好的洗涤液 300μl，不必静置，弃掉孔中洗涤液，重复洗涤共计洗板 5 次， 一次拍干。

1.4.3 每孔加入 100μl 酶结合物，轻微振荡混匀。置 37℃下孵育 30 分钟。

1.4.4 弃去板中液体，洗涤 5 次，方法同 1.4.2。

1.4.5 每孔加底物显色液 100μl，室温（20~25℃）避光显色 10 分钟。

1.4.6 每孔加终止液 50μl。10 分钟内用酶标仪测定并记录各孔在 630nm 波长处的吸光度（OD）值（测定前轻轻振匀，勿溢出）