［产品名称］鱼类白介素1βELISA试剂盒产品说明书

［英文名称］IL-1β ELISA Kit

［货号］ZK-F6229

［试剂盒保存条件、保质期］2-8℃低温保存下，6个月的保质期。

［运输方式］当地客户可以由专门配送人员免费*货快递，外地客户当天下单当天免费快递*。

［技术服务］凡购买子科生物子科生物任何一款ELISA酶联免疫分析检测试剂盒，都可以享受免费代测服务，外地客户可以由技术老师的指导下正确放置好样本的保存方式后快递邮寄到我公司技术部，本地客户可以享受免费上门取样服务！

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鱼类白介素1βELISA试剂盒产品说明书

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样本的采集及保存

一般的生物标本包括有：

血液、体液、内脏器官、粪便、胃液、活检组织、组织提取液、天然孔分泌物及各种表达系统的表达产物等，一般为无菌操作，低温保存(-80℃、液氮)

一．如果采集的实质器官则要求：

1、 器官实质不能太小

2、 以采集实质性病灶区为佳：如淋巴结、*、非、肺、脾以及肠管等病毒、病菌聚集的地方为佳

3、 同一病例装入同一容器，并做好标记

4、 应在0-8℃的低温储存和运输

5、 实质性器官的处理：

5.1、取实质性器官约0.5mg左右，充分剪碎或研磨

5.2、加入约500ul的/生理盐水，充分混匀

5.3、离心5000rmp x10min，去上清

5.4、-20℃保存，作为待检标本(切勿反复冻融)

二．体液(常见的包括血清、血浆、唾液以及尿液等)的处理方式

1、血液包括血浆和血清，它们的主要区别就是：血清凝血而血浆不凝血，所以它们的处理方式也就不一样

1.1、采集血浆时一般不加抗凝剂(主要为枸橼酸盐和柠檬酸盐)，采集后立即离心800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；

1.2、如要采集血清，一般要加入总体积1%的抗凝剂，采集后先室温或4℃静置半小时后，800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；

2、胃液和唾液的采集方式一般现采现用，但是一般饭后半小时内不易采集，因为刚进食的唾液中富含丰富的唾液淀粉酶，*的采集的时间时空腹采集；

3、尿液的采集方式基本和唾液一样的，即现采现用，但是一般隔夜尿不采集；

4、组织提取液如肺泡灌洗液等，采集后离心分离，800-1000rmp x 5min，取上清，-20℃或4℃保存备用；

三、粪便以及天然孔排泄物：采集后一般现用/生理盐水溶解，充分混匀，800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；

四、活检组织一般进行穿刺检测，最常见的就是肝活检，像病毒性肝炎、脂肪肝、各种类型的肝硬化等进行活检简单方便、准确。

五、表达产物的检测

(一)真核表达产物

1、 细胞上清(分泌性蛋白)

1.2、贴壁细胞或半贴壁，直接将细胞培养上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

1.2、不贴壁细胞，将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmp x10min，吸取上清至另一10ml离心管中，10000rmp x10min， -20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

2、 细胞裂解物(非分泌性蛋白)

2.1、贴壁细胞或半贴壁，直接将细胞培养上清吸出，然后用001M (pH 7.4)将细胞吹下至10ml离心管，500-800rmp x10min，弃上清，沉淀转移至1.5ml离心管中， DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

2.2、不贴壁细胞，将培养基和细胞转移至10ml离心管，500-800rmp x10min，弃上清，沉淀移至另一10ml离心管中，0.01M (pH 7.4)重悬，500-800rmp x10min，弃上清，沉淀移至1.5ml离心管中， DDW重悬，置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清， -20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

(二)原核(大肠杆菌表达系统)表达产物

1、表达上清(非融合性蛋白)

直接将培养物和上清吸出，10000rmp x10min， 取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

2、菌体裂解物(融合性蛋白)

直接将培养物和上清吸出，10000rmp x10min，弃上清，沉淀用洗一遍，500-800rmp x10min，弃上清，DDW重悬沉淀，冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解，10000rmp x10min，取上清，-20℃或4℃保存，作为标本进行检测，如有需要可进行透析或纯化处理；

鱼类白介素1βELISA试剂盒产品说明书操作步骤

1. 取出试剂盒，于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。

2. 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。

3. 空白微孔中加入50μl的样品，空白对照加入50μl的蒸馏水；

4. 在样品孔中加入10μl的生物素；(不含空白对照孔,切忌：生物素只加样品孔！)

5. 在各孔中加入100μl的酶标记溶液；(不含空白对照孔)

6. 将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1小时；(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)

7. 充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；(浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释)

8. 酶标板洗涤后用吸水纸 拍干；

9. 各孔加入显色剂A、B液各50μl；(不含空白对照孔)

10. 20-25℃下避光反应15分钟；

11.各孔加入50μl终止液，终止反应；

鱼类白介素1βELISA试剂盒产品说明书

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